(2,2'-(3,3'-dioxidobiphenyl-4,4'-diyldiazo)bis(6-(4-(3-(diethylamino)propylamino)-6-(3-(diethylammonio)propylamino)-1,3,5-triazin-2-ylamino)-3-sulfonato-1-naphtholato))dicopper(II) acetate lactate

Endpoint summary

Additional information

The data presented in this dossier only allow a qualitative of the toxicokinetic behaviour of Blue 10 25 964.


However, a couple of significant conclusions can be made.

Physico-chemical data:

Blue 10 25 964 is a blue powder, which serves as a basic dyestuff for paper tissues. The substance has a MMD < 22 um
(50% mass below or equal to 22 um). The water solubility was determined to be greater than 300000 mg/L.


Toxicological data:

Blue 10 25 964 was tested for its acute oral and dermal toxicity properties, for subacute oral toxicity and for
irritant effects on skin and eyes. The potential to cause skin sensitization was evaluated with the Maximisation Test.
Two mutagenicity tests were performed with Blue 1025 964 .

In the tests for acute oral and dermal toxicity, the substance was applied to Wistar rats at a single dose level
of 5000 and 2000 mg/kg body weight respectively. The substance was "not classified" according to the EU classification criteria.

Deaths occurred during the acute oral toxicity test, both in male and female rats. All deaths occurred within the first
four hours of dosing. Macroscopic examination revealed a blue staining of stomach and intestine. Lethargy and/or
convulsions were seen in about half of the animals during the first day. Piloerection was also occasionally seen during this time.

In the acute dermal toxicity test no macroscopic findings at necropsy were recorded. No clinical signs of toxicity were
observed during the study period. No deaths occurred during the test. Erythema was observed in 1 male and 1 female over
the first 3-4 days at the treatment site. Blue staining was also observed and had disappeared by day 12-13. All animals
showed body weight gain over the study period.

In the skin irritation test, no clinical signs of systemic toxicity were noted and no mortality occurred. The observed
skin irritation consisted of very slight erythema in all three animals. The irritation was reversible within 24 hours
after exposure in all three animals. The test item caused a blue staining of the treated skin in all three animals. This was noted 45 minutes after test item exposure.
Coloration disappeared in one animal at 24 hours. Neither alterations of the treated skin were observed nor were
corrosive effects evident on the skin.

According to EU-criteria the substance is not irritating to the rabbit skin.

The instillation of Blue 10 25 964 into the eye affected the cornea and the iris of one animal and affected the
conjunctivae of all three animals. The opacity of the cornea was reversible within 7 days and the injection of the iris
within 48 hours in one animal. The irritation of the conjunctivae was reversible within 14 days in all three animals. Blue discoloration and/or adherence of the test item in the treated eye were observed in all three animals.
There was no evidence of ocular corrosion.

According to EU-criteria the substance is not irritating to the rabbit eye.

Blue 10 25 964 was found to be a sensitizer according to the Maximisation sensitization test.

The epidermal exposure resulted in seven positive sensitization reactions in response to the 5% concentration.
This corresponds to a sensitization rate of 35%. The reactions were characterized by redness and scaliness. No
symptoms of systemic toxicity nor mortality were observed in all animals. Therefore, according to EU-criteria the
substance is sensitizing to guinea pig skin.

In the subacute toxicity test, repeated oral (gavage) administrations of Blue 10 25 964 to Wistar rats at doses of
50, 200 and 1000 mg/kg/day for 28 days resulted in no mortality, no clinical signs of toxicological relevance
during weekly observations or during functional observational battery, no effects on the body weight and
body gain, no effects on haematology, clinical biochemistry or urinalysis, no effects on organ weights and on microscopic/macroscopic findings. No effects were seen in the eye following ophthalmological examination. Dark feces
were recorded in all treated animals from day 5 of treatment until termination. The macroscopic examination revealed no
black appearance of gastro-intestinal tissue. Based on the results of the repeated dose oral toxicity, the no observed-
adverse-effect-level (NOAEL) of Blue 10 25 964 was determined to be 1000 mg/kg/day body weight.

Because of the possibility of release of 3,3'-dihydroxy-benzidine, known for its genotoxic effects, from metabolism, a Prival-Mitchell modified Ames Test was conducted. The bacterial reverse mutagenic assay showed that the item did not induce gene mutations by base pair changes or frameshifts in the genome of the strains used.
Therefore, Blue 10 25 964 is considered to be non-mutagenic in this Salmonella typhimurium and Escherichia coli reverse
mutation assay.

In the mammalian bone marrow Micronucleus Assay (in vivo), Blue 10 25 964 did not induce micronuclei in the bone marrow
cells of mouse. No increase in the frequency of micronucleated polychromatic erythrocytes was observed.


Absorption and metabolism:

Blue 10 25 964 is characterized by a very high water solubility (>300 g/L), a log Pow <-4 and a high molecular weight. These characteristics indicate that dermal absorption will be very low and that absorption following
oral exposure will also be hampered. Moreover, the high hydrophilicity and very low octanol - water partition
coefficient of Blue 10 25 964 do not indicate a potential for absorption in lipids. Metabolism via hydrolysis is not
expected.

The substance has a MMD ca. 22 um (50% mass circa 22 um), thus indicating a certain amount of the substance to settle
in the nasopharyngeal region, when exposed to dusts.


Distribution and excretion:

As Blue 10 25 964 is a highly water soluble product, potential for accumulation in fatty tissue can be neglected.
Due to its high molecular weight elimination via bile is likely to be the main excretion mechanism.

On the base of the present data, neither a conclusion on whether the substance is metabolized, nor a conclusion about
the distribution pattern can be drawn.